1 在有機(jī)相與水相混合之后測(cè)量pH

pH計(jì)是經(jīng)過校準(zhǔn)專門用來準(zhǔn)確測(cè)定水溶液的pH值的，因?yàn)樾?zhǔn)用的緩沖液是水溶液。如果用來測(cè)量混合了有機(jī)相的流動(dòng)相，結(jié)果會(huì)有所偏差。不過最重要的是測(cè)量要保持一致性。如果習(xí)慣于混合之后再測(cè)pH，也是可以的，只是在發(fā)表方法的時(shí)候要注明以便別人按同樣的方法測(cè)量。

2 不使用緩沖液

緩沖液是用來保持特定的pH值并緩沖pH值的變化的。很多因素例如樣品基質(zhì)、空氣中的CO2、甚至實(shí)驗(yàn)用水的來源都有可能改變流動(dòng)相的pH值并造成保留時(shí)間的漂移和峰形的變化。（甲酸和TFA并不是緩沖液）

3 緩沖體系選擇錯(cuò)誤

緩沖鹽的最優(yōu)pH區(qū)間一般是±1pH。超出這個(gè)范圍緩沖能力急劇下降。所以在選擇緩沖體系的時(shí)候要注意體系的pH適用區(qū)間包含你所需要的pH。

4 將緩沖液加入有機(jī)溶劑

當(dāng)混合流動(dòng)相的時(shí)候，將緩沖液加入有機(jī)溶劑可能會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽析出的問題，很多情況下析出的的晶體非常微小，肉眼觀察不到，但是會(huì)對(duì)泵和柱子造成傷害。所以，需要混合流動(dòng)相的時(shí)候，要反過來，將有機(jī)相加入緩沖液中，大多數(shù)情況下可以避免緩沖鹽析出的問題。

5 用泵混合有機(jī)相和水相

雖然新一代的泵能夠非常有效非常精確的混合流動(dòng)相和在線脫氣，但是并不是所有人都在用最新的儀器，在有些實(shí)驗(yàn)室里，超過二十年的儀器也依然在發(fā)揮作用。所以，在較老的儀器上，預(yù)混合有機(jī)相和水相并且用單通道100%的模式可能會(huì)有助于減小極限波動(dòng)和降低同種方法在不同儀器之間的差異。

6 沒有使用正確的酸堿來調(diào)整緩沖液的pH值

請(qǐng)使用中和后能夠生成相應(yīng)的鹽的酸堿調(diào)整緩沖液的pH值。例如磷酸鈉鹽緩沖液只能使用磷酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值，而不能使用鹽酸或氫氧化鉀。

7 緩沖液配制信息不充分，例如：稱取5g 磷酸鈉溶解進(jìn)1000ml水中

緩沖鹽的類型（例如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，磷酸鈉）決定了他們的適用pH區(qū)間。摩爾濃度決定了緩沖液的強(qiáng)度。所以一定要說清楚用的具體是什么鹽，緩沖液的摩爾濃度是多少。

8 在不確定HPLC系統(tǒng)的管路中的液體類型的情況下就直接轉(zhuǎn)換成有機(jī)相

如果前次運(yùn)行管路A中是緩沖鹽，那么直接將其用在有機(jī)相中極有可能造成緩沖鹽析出并堵塞和損壞泵以及相應(yīng)的管路。所以如果不確定就要在使用前用高水相體系沖洗。

9 為了用盡最后一點(diǎn)流動(dòng)相，傾斜放置溶劑瓶

在試驗(yàn)中我們經(jīng)常會(huì)遇到這種情況：樣品馬上就要測(cè)完了，可是流動(dòng)相液快要見底了。這時(shí)候很多人會(huì)選擇用最后一點(diǎn)流動(dòng)相勉強(qiáng)完成實(shí)驗(yàn)或者傾斜溶劑瓶以便管路更好的吸取最后一點(diǎn)流動(dòng)相。這種做法是不可取的，且不說有空氣進(jìn)入系統(tǒng)的麻煩，流動(dòng)相成分的改變就會(huì)導(dǎo)致很大的誤差。在試驗(yàn)過程中，流動(dòng)相中的有機(jī)相會(huì)揮發(fā)一部分，所以剛配好的流動(dòng)相與用了一段時(shí)間的流動(dòng)相會(huì)有微小的差異。一般情況下影響不大，隨著剩余溶劑的減少，這個(gè)影響是會(huì)積累的，所以，不要太摳門了。

10 超聲脫氣

超聲波具有熱效應(yīng)，用超聲波脫氣，特別是長時(shí)間脫氣，可能會(huì)加速有機(jī)溶劑的揮發(fā)，造成流動(dòng)相比例變化。所以可以在過濾完流動(dòng)相的時(shí)候，保持真空泵運(yùn)行五分鐘再倒出流動(dòng)相。這樣，過濾和脫氣就能一步到位。

注：以上有些經(jīng)驗(yàn)只適用于預(yù)混合的流動(dòng)相，比如9和10。

來源：分析化學(xué)